實驗部分

化學制品。這些化合物要么在羅氏創(chuàng)新中心合成，要么從不同的商業(yè)來源購買。通過向1 L蒸餾水中添加4.86 g KH2PO4和2.02 g Na2HPO4（密蘇里州圣路易斯市西格瑪），制備pH值為6.5、0.05 M的磷酸鹽緩沖液，然后通過密理博Express PLUS過濾器（德國達姆施塔特密理博0.22μM）過濾。FaSSIF buffer準備從SIF粉末（BioReavangtcom，Croydon，英國），根據(jù)一個詳細的協(xié)議。15

在水和FaSSIF介質(zhì)中的平衡溶解度。將精確稱量的約1 mg化合物干粉置于玻璃管中，并添加330μL緩沖液。然后將樣品超聲處理1小時（Branson 1210，Branson Ultrasonics，Danbury，CT），在室溫下?lián)u動2小時，并靜置過夜以平衡。第二天，檢查樣品的pH值，并通過MultiScreenHTS PCF過濾器（德國達姆施塔特密理博）過濾溶液。用0.05 M HCl/20%乙腈（v/v）稀釋濾液的等份，以生成三種不同的樣品：未稀釋和稀釋為1:10和1:100?；衔镄是€由在0.05 M HCl/20%乙腈（v/v）中稀釋的標準1 mg/mL二甲基亞砜溶液生成。校準標準品和樣品隨后通過LC進行分析?紫外線?MS，如下所述。

溶解度增強SE計算為在FaSSIF和水性緩沖液中測得的溶解度比率（等式1）：

表面活性測定。化合物在DMSO中連續(xù)稀釋超過12種不同濃度，并在pH值為6.5的0.05 M磷酸鹽緩沖液中添加至最終10%的DMSO含量。最終化合物濃度默認范圍為10 nM至10 mM。在第二次實驗中，對于達到溶解度極限或需要對相關(guān)濃度范圍進行解析以確定最佳參數(shù)的情況，定義了替代濃度范圍。樣品靜置10分鐘，以便在液體中平衡?空中接口。表面壓力分布在張力計（MultiPi WS1，Kibron Inc.，芬蘭赫爾辛基）上進行，通過之前的測量（72.8 mN/m）對50μL等份樣品進行校準。通過對生成的等溫線進行曲線擬合確定表面活性參數(shù)，并根據(jù)經(jīng)典的空氣吉布斯熱力學理論進行計算?水里，臉上。主要導出參數(shù)如下。（i）考：空氣?水分配系數(shù)，來自等式2

式中，π對應(yīng)于表面壓力，C對應(yīng)于化合物濃度。（ii）CMC：對應(yīng)于最大表面壓力下平臺截距和曲線外推斜率的臨界膠束濃度(?π/?lnc）處于拐點（圖3）。（iii）ΔΔGam：式3中的兩親性

式中，R是理想氣體常數(shù)，T是以開爾文為單位的溫度。（iv）As：界面面積，來自等式4

其中NA是阿伏伽德羅的數(shù)字。

電離研究。電離常數(shù)（PKA）是通過PrimuleSGA儀器（天狼星分析儀器有限公司，森林街，英國）分光光度法獲得的。在室溫下，以恒定流速將試驗品的水溶液注入流動的pH梯度中。監(jiān)測化合物紫外吸光度的變化，作為pH梯度的函數(shù)，并在紫外波長處測定電離常數(shù)，其中化合物吸光度的變化率達到最大值。通過按比例混合兩種流動緩沖液（含10%/vol甲醇），建立pH梯度。緩沖液是弱酸和弱堿的混合物，在240 nm波長以上吸收不明顯。對于電離常數(shù)未經(jīng)實驗測定的化合物，pKa是使用現(xiàn)有的公共和羅氏專利化合物訓練的市售Moka-in-silico模型計算的。16

親脂性（logD）測定。在分配實驗之前，在室溫下，辛醇和pH為6.5的25 mM磷酸鹽緩沖液相互飽和。將化合物作為10mM的DMSO儲備溶液添加到辛醇飽和磷酸鹽緩沖液中，得到100μM的樣品溶液。然后，將1.2 mL溶液通過密理博96深井過濾器（密理博，達姆施塔特，德國）過濾到Nunc 96深井板（Nalge Nunc International，Rochester，NY）中，并用200μL辛醇飽和磷酸鹽緩沖液稀釋至最終1.4 mL體積。將等分濾液（Vaq=150μL）轉(zhuǎn)移至羅氏公司生產(chǎn)的Teflon 96孔板上，并通過自動液體處理系統(tǒng)覆蓋DIF管（瑞士Rapperswill Weidmann Plastics Technology AG），預(yù)涂兩種不同體積的辛醇（Voct=1和15μL；每種體積n=3）（Bio-RAPTR FRD，Beckmann Coulter，Brea，CA）或不含辛醇作為初始含水化合物濃度的參考（每種化合物n=2；Caq 0）。將分析試劑盒密封并在室溫下?lián)u動過夜，直到達到分布平衡。從特氟隆板頂部拆卸DIF管后，使用LC測定平衡時（Caqeq）和初始條件下（Caq0）水相中的化合物濃度?紫外線?MS，如下所述。

根據(jù)公式5計算分配系數(shù)logD

式中，Vaq和Voct分別是培養(yǎng)板上的飽和水相和辛醇相體積。

對于一些pH值為6.5的實驗數(shù)據(jù)不可用的化合物，使用上述相同方法在pH值為7.4時測量logD，或使用計算程序Kow_clogP17或參考文獻數(shù)據(jù)預(yù)測logP值。在這種情況下，使用ADMET預(yù)測器logD vs pH模型版本6.1（加利福尼亞州蘭開斯特Simulations Plus，Inc.，Lancaster），基于參考文獻18中開發(fā)的模型，將logD或logP值和表2中列出的pKa數(shù)據(jù)作為輸入?yún)?shù)，實現(xiàn)了pH值為6.5時logD的外推。

表2。測定了51種化合物的表面張力特性

高效液相色譜法分析化合物濃度?紫外線?MS樣品在安捷倫1260 Infinity（溶解度樣品）或安捷倫1290 Infinity（logD樣品）HPLC-MS系統(tǒng)（安捷倫科技，加利福尼亞州圣克拉拉）中進行分析，該系統(tǒng)配備DAD檢測器和API單四重質(zhì)譜儀（安捷倫6140，加利福尼亞州圣克拉拉）。將樣品注入Kinetex XB 2.6μm、2.1×50 mm（溶解度樣品）或Kinetex XB 1.7μm、2.1×30 mm（logD樣品）分析柱（Phenomenex，Torrance，CA），在60°C下操作。流動相由a（水）和B（乙腈）組成，均含有0.1%體積的甲酸。使用通用快速梯度，以1.5 mL/min（溶解度樣品）或1.0 mL/min（logD樣品）的流速進行梯度洗脫。通過DAD檢測器后，將洗脫液引入電噴霧界面，保持以下源設(shè)置：毛細管電壓+3.5 kV，干燥氣體流量（N2）13 L/min，霧化器壓力60 psig，干燥氣體溫度350°C。偽分子離子強度積分，[M+H]+，在單反應(yīng)監(jiān)測模式（SRM）下獲取。對于logD樣品，通過注入1、3和5μL對照溶液完成MS數(shù)據(jù)的內(nèi)部校準。如果UV靈敏度足夠，則使用適當波長處的峰面積進行計算。